Plateletrich plasma influence on human osteoblast growth

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Avaliação Incipiente do Plasma Rico em Plaquetas na proliferação de osteoblastos humanos: estudo in vitro Nome: Cimara Fortes Ferreira Orientador: Ricardo de Souza Magini Co-orientador: José Scarso Filho CEPID-UFSC\ Laboratório Associado: Lab. de Virologia Aplicada, MIP-UFSC.

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OrtopediaCirurgia Maxilofacial Website, 2003 Introdução Implantodontia

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Plasma Rico em Plaquetas Introdução Knighton et al., 1990 Gânio et al., 1993 Gronthos e Simmons, 1995 Slater et al., 1995

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Proposta Suplementar meio de cultura com PRP para avaliar o seu efeito proliferativo sobre osteoblastos humanos.

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Geral Obter base científica para estudos abordando a otimização de enxertia óssea. Objetivos Específico Verificar qual a melhor concentração usada de PRP exercendo o maior efeito proliferativo dos osteoblastos da linhagem hFOB1.19.

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Linhagem celular hFOB1.19 American Type Culture Collection (ATCC). . Profa. Mari Cleide Sogayar –USP . Prof. José Mauro Granjeiro - FOB Metodologia

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Nuaire ® US Autoflow CO2 Water-Jacketed incubator, USA Incubação Materiais

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LVA - MIP Câmara de Fluxo Laminar Materiais Câmara de Fluxo Laminar

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BD FalconTM 96-well Elisa plate, Biosciences, USA) Microplaca Materiais

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MEM suplementado com HAM F-12, 10% de SFB, 1% solução de PSA Materiais Meio de Cultura para osteoblastos

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SCARSO FILHO, 2002 Materiais Superfície de adesão

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Microscópio Olympus Biosystems (LVA MIP) SCARSO FILHO, 2002 Materiais Subconfluência

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Tripsinização Materiais Cultura de osteoblastos humanos

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SCARSO FILHO, 2002 Métodos Teste de proliferação celular C = N x 104 C = Células/1 mL N = Média

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Métodos Teste de proliferação celular Plaqueamento de 3 x 104 células por poço.

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Obtenção do PRP Metodologia Vacuntainer de 5 mL

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COLETA Centrífuga ALC (Centrifugette 4206 ALC, ACE Surgical Supply Company Inc, Brockton, MA, USA) Centrifugação Metodologia MACEDO et al., 2003

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1a. Centrifugação Metodologia

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Metodologia 2a. Centrifugação

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Diluição do PRP Metodologia

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Soro Fetal Bovino Metodologia

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Metodologia PRP

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Metodologia Substituição do meio de cultura

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Metodologia Ativação do PRP ANITUA, 1999

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ANÁLISE QUANTITATIVA Metodologia Ensaio do MTT (Mossman, 1983) ISOGAI et al., 2000

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Metodologia Ensaio do MTT (1 mg/mL) 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L 50 ?L

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Metodologia Dissolução dos cristais de formazan

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Metodologia Capacidade do poço 300 ?L 140 ?L Meio de Cultura + 50 ?L Solução de MTT 100 ?L DMSO 290 ?L Total

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ELX 800 ( Biotek Instruments, Inc.) Metodologia Leitor de Elisa

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Metodologia Espectrofotometria de Varredura Prof. Marcelo Marasquin Mestrado em Biotecnologia, Centro de Ciências Agrárias (CCA) 200 nm 540nm 750 nm | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |

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Ultrospec 3000 (Pharmacia Bio-tek, Canadá) Metodologia Espectrofotometria de Varredura

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ANÁLISE QUALITATIVA Profa. Zenilda Laurita Bouzon Dept. de Biologia Celular, Embriologia e Genética (BEG) do Centro de Ciências Biológicas da UFSC Metodologia Zur Nieden; Kempka; Ahr, 2003 Análise Morfológica por meio de Imunofluorescência

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ANÁLISE QUANTITATIVA 50% PRP Picos de absorbância 204,9 …460 nm 601 nm 25% PRP Picos de absorbância 464,9 … 501,7 nm 12,5% PRP Picos de absorbância 220,3 … 293.8 nm 6,125% PRP Picos de absorbância 204,9 … 378,2 nm 1- Espectrofotometria de varredura do PRP de 200 a 750 nm Resultados

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2- Análise de proliferação celular 2.1 Ensaio do MTT para o experimento sem SFB Resultados 667,6 433,0 190,7 117,1

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2- Análise de proliferação celular 2.1 Ensaio do MTT para Experimento com 10% de SFB Resultados 734,1 445,3 260,3 147,0

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Resultados 2- Imunoensaio 100 x

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Resultados 2- Imunoensaio 40 x

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Análise de Variância (ANOVA) Verificar se houve diferença estatística entre os resultados. Teste de Tukey Colocando em prova a hipótese da igualdade entre os grupos. Estatística

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Estatística Grupo sem SFB Grupo com 10% de SFB

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Conclusão 1) O suplemento do meio de cultura com 12,5% ou 6,125% de PRP não apresenta efeito estatisticamente significativo na proliferação de osteoblastos da linhagem hFOB1.19.

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Conclusão 2) A metodologia envolvendo o uso do PRP gel para a aplicação do ensaio do MTT deve ser modificada para que os resultados sejam coerentes.

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Conclusão 3) O suplemento do meio de cultura com 50% de PRP mostrou melhor efeito proliferativo, sugerindo o PRP como sendo uma estratégia promissora na otimização da proliferação de células do tecido ósseo.

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Cultura Celular Laboratório Células Conhecimento Treinamento Agradecimentos

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Plasma Rico em Plaquetas CEPID PRP Conhecimento Treinamento Agradecimentos

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Agradecimentos Incentivo constante Prof. Ricardo de Souza Magini

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Curso de Cultura Celular Animal Prof. Cláudia M. de O. Simões Avaliação do plasma rico em plaquetas na proliferação celular – Estudo “in vitro”. Tese de doutorado, UFSC. Prof. José Scarso Filho Conhecimento Agradecimentos

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Laboratório de Bioquímica da Faculdade de Odontologia de Bauru Prof. José Mauro Granjeiro Esther Takamori Células Treinamento Agradecimentos

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Laboratório Laboratório de Virologia Aplicada – MIP, UFSC. Prof. Cláudia de M. de O. Simões Márcia Cristina Carriel Gomes Agradecimentos

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	cimarafortes@hotmail.com 5 Years ago.



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